52 ม.1 ต.ร มใต อ.แม ร ม จ.เช ยงใหม

1 การตรวจว เคราะห ยาในอาหารส ตว ส ทธ พร พ ร ยายน ผ เช ยวชาญด านการว เคราะห ค ณภาพส นค าปศ ส ตว กล มตรวจสอบค ณภาพอาหารส ตว ส าน กตรวจสอบค ณภาพส นค าปศ ส ตว โทร/โทรสาร , 59 หร อ 28 พฤศจ กายน 2561

2 91 หม ท 4 ถนนต วานนท ตาบลบางกะด อาเภอเม อง จ งหว ดปท มธาน หมายเลขโทรศ พท หมายเลขโทรสาร address: [email protected] ต ดต อส งต วอย างและร บผลทดสอบเร งด วนโทร/โทรสาร Phiriyayon,

3 ห องปฏ บ ต การกล มตรวจสอบค ณภาพอาหารส ตว Phiriyayon,

4 ห องปฏ บ ต การกล มตรวจสอบค ณภาพอาหารส ตว Phiriyayon,

5 การว เคราะห ต วอย างด านกายภาพ ว เคราะห ชน ดว ตาม นและแร ธาต ว เคราะห ส วนประกอบ (Ingredients) ว เคราะห การปลอมปน (Adulteration) * ชน ดยาในอาหารส ตว Chlortetracycline (CTC) Oxytetracycline (OTC) Nitrofurazone (NFZ) Nitrofurantoin (NFT) Furazolidone (FZD) Furaltadone (FZD) Nitrovin (NIV) Zoalene (ZOA) Roxarzone (ROX) Carbadox (CBX) * หมายถ ง รายการท ได ร บรองความสามารถห องปฏ บ ต การทดสอบตามมาตรฐาน ISO/IEC 17025:2005 Phiriyayon,

6 การว เคราะห ต วอย างด านจ ลช วว ทยา จ ลช วว ทยา 1 จ ลช วว ทยา 2 จ ลช วว ทยา 3 แบคท เร ยก อโรค Salmonella spp.* Campylobacter spp. Listeria monocytogenes Staphylococcus aureus Escherichia coli Enterobacter sakasakii Coliform การน บปร มาณจ ล นทร ย Total bacteria count* Enumeration of yeast&molds* สารเสร มช วนะ (Probiotics) Bacillus spp. Lactobacillus spp. Saccharomyces spp. Bifidobacterium spp. Pediococcus spp. Lactic acid bacteria Enterococcus faecium Inhibitory microbiological assay Antibiotic microbiological assay* DNA & GMOs * หมายถ ง รายการท ได ร บรองความสามารถห องปฏ บ ต การทดสอบตามมาตรฐาน Phiriyayon, 2018ISO/IEC 17025:2005 6

7 การว เคราะห ต วอย างด านเคม เคม 1 ค ณค าทางโภชนาการ โปรต น* กาก* Pepsin digestibility เถ าท ไม ละลายในกรด ทราย แร ธาต (Ca, P, Fe, Zn, Cu, Mg, Mn, Na) เคม 2 ค ณค าทางโภชนาการ ไขม นในอาหารส ตว และว ตถ ด บอาหารส ตว * ไขม นในผล ตภ ณฑ นมและอาหาร เสร ม ไขม นในอาหารส ตว เล ยง (ส น ข, แมว) ความช น* เถ า* เกล อ เคม 3 โลหะหน ก ว ตาม น ย เร ย และย ร เอส แอคต ว ต โลหะหน ก Cd*, Pb, As, Hg ว ตาม น B 2 ย เร ย ย ร เอส แอคต ว ต * หมายถ ง รายการท ได ร บรองความสามารถห องปฏ บ ต การทดสอบตามมาตรฐาน ISO/IEC 17025:2005 Phiriyayon,

8 การว เคราะห ต วอย างด านพ ษว ทยาและช วเคม 1. Banned substances Beta agonists* Chloramphenicol Carbadox* Nitroimidazoles* Nitrofurans Olaquindox* Diethylstilbestrol hormone Melamine & analogue 3. Anticoccidial substance 4. Contaminants PCBs Dioxins 5. Pesticides OCPs 2. Antimicrobial drugs Sulfonamides -lactams Tetracyclines* Macrolides Tiamulin Lincomycin Fluoroquinolones Polymyxins (Colistin) 6. Dyes Canthaxanthin Astaxanthin 7. Hormones Diethylstilbestrol hormone Hexestrol hormone 8. Mycotoxins Aflatoxins (total)* Aflatoxin (B 1, B 2, G 1, G 2 )* Aflatoxin M 1 Ochratoxin A Zearalenone Fumonisins (FB 1, FB 2, FB 3 ) T-2 + HT-2 Toxin Deoxynivalenol (DON) 9. Amino acid * หมายถ ง รายการท ได ร บรองความสามารถห องปฏ บ ต การทดสอบตามมาตรฐาน ISO/IEC 17025:2005 Phiriyayon,

9 การตรวจว เคราะห ยาในอาหารส ตว การตรวจสอบชน ดยาเบ องต น (Screening test) การทดสอบหาสารปฏ ช วนะโดยว ธ เบ องต นทางจ ลช วว ทยา (Microassay) การตรวจว เคราะห ยาตกค างในอาหารส ตว โดยใช เคร องม อช นส ง Phiriyayon,

10 ว ธ ว เคราะห ด านกายภาพ ด านเคม ด านจ ลช วว ทยา ด านพ ษว ทยาและช วเคม (สารตกค าง) ด านพ ษว ทยาและช วเคม (สารพ ษเช อรา) Phiriyayon,

11 การตรวจควบค มค ณภาพอาหารส ตว 1. ร บต วอย างจากท องท และหน วยงานต างๆ ด วยรห สต วอย างจากท องท พร อมใบส งต วอย างอาหารส ตว ส าหร บทดสอบและเอกสารรายละเอ ยดต วอย างอาหารส ตว 2. กาหนดรห ส Lab code 3. ส งตรวจหาชน ดยาเบ องต นตามต นเร องและ พรบ. 4. ส งย นย นหาชน ดและปร มาณด วยเคร องม อช นส ง 5. ส งเอกสารผลว เคราะห กล บไปย งหน วยงานต นเร องและจ ดทาเอกสารแจ งเต อนความไม ปลอดภ ย (Rapid Alert System for Feed Safety) 6. หน วยงานต นเร องแปลงรห สก นเป นรห สต วอย างและท มาของต วอย าง 7. พ จารณาดาเน นการควบค มตามหล กฐานท ม 8. หากผลว เคราะห ไม ตรงก บบร ษ ทหร อการตรวจท Lab อ น ควรส งต วอย างท เก บไว มาตรวจสอบหร อ สอบสวนหาสาเหต เก บซ า โดยต องประสานก บผ จ ดการว ชาการกล มเพ อร วมก นหาสาเหต 9. ร บรองผลว เคราะห เฉพาะต วอย างท มาถ งห องปฏ บ ต การและม หล กฐานรายละเอ ยดเท าน น ข อ 1-9 ดาเน นงานว เคราะห และควบค มผลทดสอบปฏ บ ต ตามระบบประก นค ณภาพห องปฏ บ ต การ ISO/IEC 17025:2005 และตาม directive EU เร องการทดสอบความใช ได ของว ธ และ Good Laboratory Practice (GLP) Phiriyayon,

12 ข นตอนการตรวจสอบค ณภาพอาหารส ตว Phiriyayon,

13 ข นตอนการบดต วอย างเพ อเตร ยมว เคราะห ค ณภาพอาหารส ตว Phiriyayon,

14 Drug residue analysis FEED SAMPLE Pesticide & Environmental Substances DRUGs Screening Test GC, GC-MS HPLC, LC-MS/MS, LC-HRMS/MS Color test Microbiological assay ELISA Strip test CHARM II Phiriyayon,

15 Drug residue analysis Beta-agonists Nitroimidazoles Nitrofurans Tetracyclines Fluoroquinolones Sulfonamides DRUGS Polymyxins (Colistin) Coccidiostat Olaquindox Carbadox Macrolides Chloramphenicol Beta-lactams Phiriyayon,

16 Drug residue analysis Beta-agonists Nitroimidazoles Olaquindox Carbadox Sulfonamides LC-MSMS Triple quadrupole Nitrofurans Macrolides Chloramphenicol Coccidiostat Tetracyclines Polymyxins (Colistin) Beta-lactams Phiriyayon,

17 Drug residue analysis Fluoroquinolones LC-HRMS/MS Diethylstilbestrol Phiriyayon,

18 การว เคราะห ยาและสารต องห ามด วยว ธ เบ องต น (Screening test) ลาด บท สารต องห าม รายการ ว ธ ว เคราะห ย ห อ 1 Beta agonists Salbutamol Clenbuterol Ractopamine LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry Shimadzu 2 Carbadox Carbadox LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry Shimadzu 3 Chloramphenical Chloramphenical LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry Shimadzu 4 Diethylstilbestrol Diethylstilbestrol LC-HRMS/MS Thermo scientific Phiriyayon,

19 การว เคราะห ยาและสารต องห ามด วยเคร องม อช นส ง (Confirmation) ลาด บท สารต องห าม รายการ ว ธ ว เคราะห ย ห อ Nitrofurazone 5 Nitrofurans Furaltadone Nitrofurantoin LC-MS/MS Triple Quadrupole Furazolidone Mass Spectrometry Shimadzu 6 Nitroimidazoles 7 Malamine and analogues Dimetridazole Ronidazole Metronidazole Melamine Ammelide Cyromazine Cyanuric acide 8 Olaquindox Olaquindox LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry GC-MS/MS LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry Shimadzu Agilent Shimadzu Phiriyayon,

20 การว เคราะห ยาและสารต องห ามด วยเคร องม อช นส ง (Confirmation) ลาด บท ยา/กล มยา รายการ ว ธ ว เคราะห ย ห อ Amoxicillin 1 Beta-lactams 2 Fluoroquinolones Penicillin G Ceftiofur Ciprofloxacin Cinoxacin Danofloxacin Difloxacin Enoxacin Enrofloxacin Flumequine Marbofloxacin Norfloxacin Nalidixic acid Orbifloxacin Oxolinic acid Sarafloxacin Maloxacin Ofloxacin LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry LC-HRMS/MS Shimadzu Thermo scientific Phiriyayon,

21 การว เคราะห ยาและสารต องห ามด วยเคร องม อช นส ง (Confirmation) ลาด บท ยา/กล มยา รายการ ว ธ ว เคราะห ย ห อ 3 Lincomycin Lincomycin LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry Shimadzu 4 Macrolides Tylosin Tilmicosin Erythromycin 5 Polymyxins Colistin 6 Sulfonamides 7 Tetracycline Sulfamethazine Sulfadimethoxine Chlortetracycline Oxytetracycline Doxycycline LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry HPLC Shimadzu Shimadzu Shimadzu Water Phiriyayon,

22 การว เคราะห ยาและสารต องห ามด วยเคร องม อช นส ง (Confirmation) ลาด บท ยา/กล มยา รายการ ว ธ ว เคราะห ย ห อ 8 Tiamulin Tiamulin 9 Anticoccidial substance Decoquinate Diclazuril Halofuginone Lasalocid Maduramicin Monensin Narasin Nicarbazin Nigericin Robinidine Salinomycin Toltrazuril LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry Shimadzu Shimadzu Phiriyayon,

23 รายช อยาและสารมาตรฐานท ใช กล มยา รายการ ความบร ส ทธ ย ห อ Polymyxin Colistin sulfate - EDQM Penicillin G Amoxicillin trihydrate 99.4 Dr.Ehrenstorfer Cephalosporins Ceftriaxone Sodium Hemiheptahydrate 99.5 LGC Cefotaxime sodium 98 TRC Ceftiofur 99.0 Dr.Ehrenstorfer Cefquinome sulfate 96.3 Dr.Ehrenstorfer Fluoroquinolones Cirofloxacin 99.1 Fluka Enrofloxacin 98.5 Dr.Ehrenstorfer Norfloxacin 99.8 Sigma Enoxacin 99.0 Dr.Ehrenstorfer Ciprofloxacin Hydrochloride 94.0 Dr.Ehrenstorfer Danofloxacin 99.6 Fluka Sarafloxacin 97.0 Dr.Ehrenstorfer Enrofloxacin 99.2 USP Enoxacin 99.0 Dr.Ehrenstorfer Marbofloxacin 99.0 Dr.Ehrenstorfer Norfloxacin Phiriyayon, Dr.Ehrenstorfer 23

24 รายช อยาและสารมาตรฐานท ใช กล มยา รายการ ความบร ส ทธ ย ห อ Macrolides Tilmicosin - USP Tiamulin 99.0 Dr.Ehrenstorfer Nitroimidazoles Dimetridazole 99.0 Dr.Ehrenstorfer Metronidazole 99.5 Dr.Ehrenstorfer Metronidazole 99.9 Fluka Dimetridazole 99.9 Fluka Ronidazole 97 Fluka Ronidazole 99.0 Dr.Ehrenstorfer Ronidazole 97.0 Dr.Ehrenstorfer Ronidazole >99 Fluka Olaquindox Olaquindox 99.0 Dr.Ehrenstorfer Olaquindox 95.7 Fluka Phiriyayon,

25 รายช อยาและสารมาตรฐานท ใช กล มยา รายการ ความบร ส ทธ ย ห อ Beta agonists Salbutamol 99.5 Dr.Ehrenstorfer Clenbuterol Hydrochloride 98.5 Dr.Ehrenstorfer Ractopamine Hydrochloride 97.0 Dr.Ehrenstorfer Clenbuterol Hydrochloride (reference standard) - EDQM Ractopamine Hydrochloride (reference standard) 99.0 USP Salbutamol CRS (reference standard) - EDQM Salbutamol (reference standard) - EDQM Salbutamol 99 Dr.Ehrenstorfer Ractopamine Hydrochloride 98.0 Dr.Ehrenstorfer Ractopamine Hydrochloride 95.5 Sigma-Aldrich Salbutamol 99.0 Dr.Ehrenstorfer Salbutamol 99.5 Sigma-Aldrich Clenbuterol Hydrochloride 99.0 Dr.Ehrenstorfer Clenbuterol Hydrochloride 98.1 Sigma Phiriyayon,

26 รายช อยาและสารมาตรฐานท ใช กล มยา รายการ ความบร ส ทธ ย ห อ Tetracycline Chlortetracycline(1/2) 87 Sigma Doxycycline 98.0 Sigma Doxycycline 98.7 Sigma Tetracycline Hydrochloride (Reference STD) 97.6 USP Oxytetracycline (Reference STD) 90.0 USP Chlortetracycline Hydrochloride (Reference STD) EDQM Tetracycline 92.4 Sigma Oxytetracycline (Reference STD) 90.0 USP Chlortetracycline Hydrochloride (Reference STD) EDQM Chlortetracycline Hydrochloride 90.0 Sigma Doxycycline Hyclate Sigma Oxytetracycline 95.9 Sigma Doxycycline Hyclate 99.1 Sigma -Aldrich Oxytetracycline Hydrochloride 100 USP Chlortetracycline Hydrochloride 92.4 EDQM Chlortetracycline Hydrochloride 93.3 Sigma Doxycycline Hyclate 98.7 Dr.Ehrenstorfer Tetracycline Hydrochloride 97.7 Dr.Ehrenstorfer Tetracycline Hydrochloride 98.0 Sigma -Aldrich

27 รายช อยาและสารมาตรฐานท ใช กล มยา รายการ ความบร ส ทธ ย ห อ Nitrofurans Furazolidone 99.9 Sigma /Fluka Nitrofurantion 99.9 Sigma /Fluka Nitrofurantion 99.4 Fluka Furaltadone Hydrochloride 96.9 Carbosynth Furaltadone Hydrochloride 99.0 Dr.Ehrenstorfer Furazolidone 99.0 Dr.Ehrenstorfer Nitrofurazone 99.0 Dr.Ehrenstorfer Nitrofurantion 99.0 Dr.Ehrenstorfer

28 รายช อยาและสารมาตรฐานท ใช กล มยา รายการ ความบร ส ทธ ย ห อ Diethylstilbestrol Diethylstilbestrol 99.5 Dr.Ehrenstorfer Diethylstilbestrol 99.9 Sigma Hexestrol 99.8 Dr.Ehrenstorfer Sulfanamides Sulfamethoxypyridazine 99.0 Dr.Ehrenstorfer Sulfadimethoxine 99.0 Dr.Ehrenstorfer Chloramphenicol Chloramphenicol 99.9 Dr.Ehrenstorfer Coccidiostats Monensin sodium salt hydrate 86.3 Sigma-Aldrich Diclazuril 99.0 Dr.Ehrenstorfer Robenidine Hydrochloride 96.8 Sigma-Aldrich Lasalocid A sodium salt 99.0 Dr.Ehrenstorfer Salinomycin Sodium Salt >12 TRC

29 รายช อยาและสารมาตรฐานท ใช ช อยามาตรฐาน ความบร ส ทธ ย ห อ Colistin sulfate (salt) Purity 86.1% USP Tilmicosin - USP Tiamulin Purity 99.0% USP Lincomycin hydrochloride Purity 93% Sigma Potency 835 units/mg Bacitracin zinc salt Assay 71.4 units/mg Sigma Virginiamycin M1 Purity 98% Sigma Tylosin tartrate Potency 929 units/mg Sigma Monensin sodium salt Purity 91% Sigma Oxytetracycline dihydrate Purity >99% Sigma Chlortetracycline hydrochloride Purity 77% Sigma สารมาตรฐานเม อละลายเป น working standard สามารถเก บได นาน 1 ว น ด งน นหล งการเตร ยมสารมาตรฐานควรใช ทดสอบท นท Phiriyayon,

30 การทดสอบการกระจายต วอย างสม าเสมอเป นเน อเด ยวก น การทดสอบการปนเป อนข าม และการทดสอบการคงสภาพ 1. การทดสอบการกระจายต วอย างสม าเสมอเป นเน อเด ยวก น (Homogeneity) ใช อย างน อย 10 ต วอย าง ต องพบยาในช วง % และม ค า coefficient of variation ไม เก น 10 % 2. การทดสอบการปนเป อนข าม (Carryover) ส มต วอย างจาก 2 ช ดการผล ต carryover ได ไม เก น 5 % ส าหร บช ดแรก และ 1 % ส าหร บช ดท สอง (อ างอ งตาม (ร าง) ประกาศกรมปศ ส ตว เร อง กาหนดหล กเกณฑ ว ธ การในการทดสอบการกระจายอย าง สม าเสมอเป นเน อเด ยวก นและการทดสอบการปนเป อนข ามของยาในการผล ตอาหารส ตว ท ผสมยา กรณ ผ ร บ ใบอน ญาตผล ตอาหารส ตว ควบค มเฉพาะเพ อขาย พ.ศ....) 3. การทดสอบการคงสภาพ (Stability test) (Health Canada, 2010) ใช อย างน อย 2 batches เก บนาน 3 เด อน (Long-term conditions) ท อ ณหภ ม 25 C ± 2 C / 60% ± 5% relative humidity (RH) ท อ ณหภ ม 40 C ± 2 C / 75% ± 5% RH. Phiriyayon,

31 การตรวจสอบชน ดยาเบ องต นในอาหารส ตว Phiriyayon,

32 การตรวจสอบชน ดยาเบ องต นในอาหารส ตว โดยใช ช ดตรวจสอบชน ดยาในอาหารส ตว (Testing kits for Drugs in Feed ) พ ฒนามาจากว ธ การท ใช ในห องปฏ บ ต การด วยว ธ Colorimetric method ตรวจผลโดยใช กล องจ ลทรรศน ชน ดสเตอร โอ หล กการเก ดส ใช ทฤษฎ การเก ดส ของสารประกอบท ม โมเลก ลของสารกล ม Chromophore ทาปฏ ก ร ยาทางเคม ก บน ายาทดสอบโดยเข าไปแทนท ตรง Benzene ring ทาให เก ด สารส ข น ซ งสารประกอบแต ละชน ดจะเก ดปฏ ก ร ยาทางเคม ท ม ความจาเพาะก บ น ายาทดสอบแต ละชน ดและให สารส ท แตกต างก น Phiriyayon,

33 การตรวจสอบชน ดยาเบ องต นในอาหารส ตว (Screening test) ช ดตรวจสอบชน ดยาเบ องต นในอาหารส ตว สามารถตรวจชน ดยา 9 ชน ด ด งน สารเภส ชเคม ภ ณฑ : กล มไนโตรฟ แรนส 5 ชน ด ค อ Furazolidone (FZD) Furaltadone (FTD) Nitrofurazone (NFZ) สารเภส ชเคม ภ ณฑ ชน ดอ น ๆ 2 ชน ด ค อ Nitrofurantoin (NFT) Roxarsone (Rox) Nitrovin (Niv) Zoalene (Zoa) สารปฏ ช วนะ : Chlortetracycline (CTC) Oxytetracycline (OTC) Phiriyayon,

34 ว ธ การตรวจสอบชน ดยาเบ องต นในอาหารส ตว (Screening test) เร ยงต วอย างอาหารส ตว 1 หยดน ายาทดสอบ Nitro1= 9 หยด, Nitro 2= 1 หยด หร อ Tetra = หยดประมาณ 2/3 ของถาดหล ม 2 โรยต วอย างพอประมาณลงใน น ายาทดสอบ 3 ตรวจผลโดยใช กล องจ ลทรรศน ชน ดสเตอร โอ 4 5 Phiriyayon, 2018 ส ม วงน าเง น (FZD) ภายใต กล องจ ลทรรศน 34

35 น ายาทดสอบ ช ดตรวจสอบยาในอาหารส ตว : Screen EZ Nitro test ประกอบด วย Nitro-1 Nitro-2 Screen EZ Tetra test ประกอบด วย Tetra บ. สยามอ นเตอร ควอล ต จาก ด โทร: โทรสาร: Phiriyayon,

36 ผลการตรวจสอบชน ดยาเบ องต นในอาหารส ตว (Screening test) Chlortetracycline (CTC) จ ดส ม วง Oxytetracycline (OTC) จ ดส แดงเข ม น ายาทดสอบ Screen EZ Tetra test :Tetra หยดประมาณ 2/3 ของถาดหล ม Phiriyayon,

37 ผลการตรวจสอบชน ดยาเบ องต นในอาหารส ตว (Screening test) Furazolidone จ ดส ม วง - น าเง น Furaltadone จ ดส น าเง น คราม Nitrofurazone จ ดส แดงบานเย น Nitrofurantoin จ ดส เหล องและจะเปล ยนเป นส ม วง Nitrovin จ ดส ฟ าสด น ายาทดสอบ Screen EZ Nitro test: Phiriyayon, 2018 Nitro-1= 9 หยด, Nitro-2 = 1 หยด 37

38 ผลการตรวจสอบชน ดยาเบ องต นในอาหารส ตว (Screening test) Roxarsone จ ดส เหล องเข มล กษณะเป นเย อ Zoalene จ ดส เข ยวใบไม เข ม กระจายหายเร ว น ายาทดสอบ Screen EZ Nitro test: Nitro-1= 9 หยด, Nitro-2 = 1 หยด Phiriyayon,

39 การทดสอบหาสารปฏ ช วนะโดยว ธ เบ องต นทางจ ลช วว ทยา (Microassay) Phiriyayon,

40 การทดสอบหาสารปฏ ช วนะในอาหารส ตว โดยว ธ เบ องต นทางจ ลช วว ทยา Roux flask ป นเหว ยงท ความเร ว 3000 รอบ ต อนาท เป นเวลา 10 นาท ทาการเจ อจางตามลาด บเพ อตรวจ น บปร มาณเช อจ ล นทร ย มาตรฐาน เช อท ใช ในการทดสอบ ข นตอนการเตร ยมเพลท ข นตอนการวางต วอย าง ขนาด Inhibition zone Phiriyayon,

41 การทดสอบหาสารปฏ ช วนะในอาหารส ตว โดยว ธ เบ องต นทางจ ลช วว ทยา ว ธ ทดสอบ เต มเช อ(1x10 5 cfu/ml) B.subtilis ATCC 6633 (WDCM 00003) เต มลงในอาหาร AM5 B.Cereus ATCC (WDCM 00001) เต มลงใน อาหาร AM8 K. rhizophila ATCC 9341 เต มลงในอาหาร AM11 G. stearothermophilus ATCC 7953 เต มลงในอาหาร KD B. bronchiseptica ATCC 4617 เต มลงในอาหาร AM10 ด ดอาหารเล ยงเช อแต ละชน ด ปร มาตร 10 มล. ลงในจานเพาะเช อ Phiriyayon,

42 การทดสอบหาสารปฏ ช วนะในอาหารส ตว โดยว ธ เบ องต นทางจ ลช วว ทยา ว ธ ทดสอบ วางต วอย างประมาณ 0.1 กร ม ลงบนอาหารเล ยงเช อแต ละชน ด B.subtilis บ มท 30±1 o C B.cereus บ มท 30±1 o C K. rhizophila บ มท 37±1 o C o C G. stearothermophilus บ มท 62±1 o C o C B. bronchiseptica บ มท 35±1 o C ช วโมง ว ด Inhibition Zone ขนาดมากกว า 2 ม ลล เมตร โซนใส ต วอย าง Phiriyayon,

43 ว ธ หาปร มาณยา Colistin โดยว ธ ทางจ ลช วว ทยา การเตร ยมสารละลายมาตรฐาน Colistin ช ง Colistin standard 5,000 mcg ใช purified water 5 ml ละลาย โดยใช เป น Stock (ซ งสารน สามารถเก บไว ในต เย นเป นเวลา 2 ส ปดาห ) น าไปทาให ม ความเข มข นของสารด งน 0.64, 0.80, 1.00, 1.25, 1.56 mcg/ml ด วยสารละลาย 10 % buffer solution ph 6.0 Phiriyayon,

44 ว ธ หาปร มาณยา Colistin โดยว ธ ทางจ ลช วว ทยา การเตร ยมต วอย าง ช งต วอย าง 1.88 กร ม (ม ความเข มข นของ Colistin 25,000 mcg) เต ม purified water 100 ml ละลายให เข าก น ป เปต 0.20 ml เต ม สารละลาย 10 % buffer solution ph 6.0 ป เปต 1.0 ml เต ม สารละลาย 10 % buffer solution ph 6.0 Phiriyayon,

45 ว ธ หาปร มาณยา Colistin โดยว ธ ทางจ ลช วว ทยา ว ธ ปฏ บ ต งาน วาง cylinder 6 อ นบน seed layer ห างก น 2.5 cm./ 60 องศา โดยตาแหน ง 1,2,3 เป น Standard 1.0 mcg/ml และตาแหน ง4,5,6 เป นต วอย างทดสอบท ความเข มข น 0.64, 0.80,1.25,1.56 mcg/ml บ มท C / hrs. เม อครบเวลาน ามาว ดขนาดเส นผ านศ นย กลางของ Inhibitor zone จ ดทากราฟจากผลท ได โดยให แกน X แสดงขนาดของโซนใสท ว ดได (mm.) และแกน Y แสดงค าความเข มข นของ Standard (mcg/ml) ว ดขนาดโซนใสหาค า L และ H โดย L = 3a + 2b+ c e 5 H = 3e + 2d + c - e 5 อ านค าความเข มข นเฉล ยของต วอย างจาก standard curve (mcg/ml) Phiriyayon,

46 ว ธ การว เคราะห ZINC BACITRACIN ข นตอนการเตร ยมการสก ด ช งต วอย าง 10 กร ม + METHANOL / น า / HCL 25 มล. เขย า 10 นาท เต ม PHOSPHATE BUFFER PH มล. เขย า 15 นาท CENTRIFUGE เอาส วนใสมา 20 มล. ปร บ PH ให ได 6.5 ใช 1 N. NaOH ( BROMOCRESOL PURPLE เป น INDICATOR ) EVAPORATE ให ได 4 มล. ท 35 o C เจ อจางด วยน า U I.U. / มล. Phiriyayon,

47 ว ธ การว เคราะห ZINC BACITRACIN ว ธ ปฏ บ ต งาน วาง cylinder 8 อ นบน seed layer ห างก น พอประมาณ และเต มสารปฏ ช วนะประมาณ มล. * * * * * * * * บ มท 30.0 C / hrs. เม อครบเวลาน ามาว ดขนาดเส นผ านศ นย กลางของ Inhibitor zone บ นท กค าว ดได แต ละความเข มข นบนกราฟ SEMI LOGARITHM ซ งเป นค าความเข มข น LOG ในความส มพ นธ ของ INHIBITION ZONE การว เคราะห เส นท เหมาะสมส าหร บสารละลายต าส ด ใช ส ตร ( A ) SL = 7S 1 + 4S 2 + S 4 2S 8 การว เคราะห เส นท เหมาะสมส าหร บสารละลายมาตรฐานส งส ด ใช ส ตร ( B ) SH = 7S 8 + 4S 4 + S 2 2S 1 10 Phiriyayon,

48 ผลการทดสอบหาสารปฏ ช วนะในอาหารส ตว โดยว ธ เบ องต นทางจ ลช วว ทยา Bacillus subtilis ATCC 6633 (WDCM 00003) ม ความไวต อยา Lincomycin Nitrofurantoin Erythromycin และ Tetracycline Bacillus cereus ATCC (WDCM 00001) ม ความไวต อยา Nitrofurantoin Erythromycin Tetracycline และ Monensin Kocuria rhizophila ATCC 9341 ม ความไวต อยา Lincomycin Erythromycin Tetracycline Monensin และ Bacitracin zinc salt Geobacillus stearothermophilus ATCC 7953 ม ความไวต อยา Lincomycin Nitrofurantoin Erythromycin Tetracycline Monensin และ Bacitracin zinc salt Bordetella bronchiseptica ATCC 4617 ม ความไวต อยา Colistin Phiriyayon,

49 ผลการทดสอบหาสารปฏ ช วนะในอาหารส ตว โดยว ธ เบ องต นทางจ ลช วว ทยา Positive Control ใช Antimicrobial Susceptibility test discs วางบนเพลทอาหารเล ยงเช อทดสอบ ด งน Test Plate Bacillus subtilis ATCC 6633 (WDCM 00003) Bacillus cereus ATCC (WDCM 00001) Antimicrobial Susceptibility test discs Target Zone Size Maximum Zone Size Lincomycin 10 g 20 mm 28 mm Nitrofurantoin 30 g 22 mm 30 mm Erythromycin 10 g 21 mm 28 mm Tetracycline 10 g 20 mm 28 mm Nitrofurantoin 30 g 21 mm 29 mm Erythromycin 10 g 20 mm 28 mm Tetracycline 10 g 20 mm 28 mm Monensin 10 g 20 mm 27 mm Phiriyayon,

50 ผลการทดสอบหาสารปฏ ช วนะในอาหารส ตว โดยว ธ เบ องต นทางจ ลช วว ทยา Positive Control ใช Antimicrobial Susceptibility test discs วางบนเพลทอาหารเล ยงเช อทดสอบ ด งน Test Plate Kocuria rhizophila ATCC 9341 Geobacillus stearothermophilus ATCC 7953 Antimicrobial Susceptibility test discs Target Zone Size Maximum Zone Size Lincomycin 10 g 23 mm 30 mm Erythromycin 10 g 20 mm 27 mm Tetracycline 10 g 22 mm 29 mm Monensin 10 g 21 mm 30 mm Bacitracin zinc salt 10 g 21 mm 28 mm Lincomycin 10 g 22 mm 30 mm Nitrofurantoin 30 g 21 mm 30 mm Erythromycin 10 g 21 mm 28 mm Tetracycline 10 g 22 mm 29 mm Monensin 10 g 20 mm 30 mm Bacitracin zinc salt 10 g 22 mm 30 mm Phiriyayon,

51 ผลการศ กษาความเข มข นสารละลายยามาตรฐาน ขนาด Inhibitione zone (mm.) B.subtilis B.cereus K.rhizophila G.stearothermophilus S.aureus B.bronchiseptica ชน ดยา เจาะ เจาะ เจาะ เจาะ เจาะ เจาะ cup swab cup swab cup swab cup swab cup swab cup swab หล ม หล ม หล ม หล ม หล ม หล ม Tiamulin Amoxicillin Colistin Tylosin Tilmicosin Robenidine Nicarbazin Nigericin Maduramicin Monensin Diclazuril Salinomycin Halofuginone Phiriyayon,

52 ผลการศ กษาความเข มข นสารละลายยามาตรฐาน (ต อ) ขนาด Inhibitione zone (mm.) G.stearothermophilu B.subtilis B.cereus K.rhizophila ชน ดยา s S.aureus B.bronchiseptica เจาะ เจาะ เจาะ เจาะ เจาะ เจาะ cup swab cup swab cup swab cup swab cup swab หล ม หล ม หล ม หล ม หล ม หล ม cup swab Narasin Lincomycin Spiramycin Tetracycline Chlortetracycline Oxytetracycline ใช Methanol ในการละลายต วอย างยามาตรฐาน ความเข มข น 100 ppm ppm Phiriyayon,

53 ชน ดของยา เช อมาตรฐานท ใช และชน ดอาหารเล ยงเช อท เหมาะสมในการทดสอบ ทางจ ลช วว ทยาก บว ธ ว เคราะห บนว นแบบวาง Cylinder cup และว ธ ว ดความข นของเช อ Antibiotic Cylinder test Turbidmetric test Test strain Culture medium Test strain Culture medium Seed Culture Base layer Seed layer Amphomycin Micrococcus luteus ATCC Medium No.1 Amphotericin B Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 Medium No.13 Ampicillin Micrococcus luteus ATCC 9341 (Kocuria rhizophila ATCC 9341) Medium No.1 Medium No.7 Medium No.12 Medium No.11 Medium No.1 Medium No.12 Medium No Bacitracin Micrococcus luteus ATCC or Micrococcus luteus ATCC 7468 D Medium No.1 Medium No.2 Medium No.1 S. aureus ATCC Medium No.3 Carbomycin Micrococcus luteus ATCC 9341 (Kocuria rhizophila ATCC 9341) Medium No.3 Medium No.11 Medium No Chloramphenicol Micrococcus luteus ATCC 9341 (Kocuria rhizophila ATCC 9341) Medium No.3 Medium No.1 Medium No Cephalothin Saccharomyces cerevisiae ATCC 6538 P Medium No.1 Medium No.2 Medium No Colistin Bordetella bronchiseptica ATCC 4617 Medium No.9 Medium No.9 Medium No

54 ชน ดของยา เช อมาตรฐานท ใช และชน ดอาหารเล ยงเช อท เหมาะสมในการทดสอบ ทางจ ลช วว ทยาก บว ธ ว เคราะห บนว นแบบวาง Cylinder cup และว ธ ว ดความข นของเช อ Antibiotic Cylinder test Turbidmetric test Erythromycin Micrococcus luteus ATCC 9341 (Kocuria rhizophila ATCC 9341) Gentamicin (Refobacin Merck) Test strain Culture medium Test strain Culture medium Seed Culture Base layer Seed layer Medium No.3 B. subtilis ATCC 6633 Medium No.1 Kanamycin S. aureus ATCC 6538 P Medium No.1 Neomycin S. aureus ATCC 6538 P Medium No.1 Novobiocin S. epidermidis ATCC Medium No.1 Oleandomycin S. epidermidis ATCC Medium No.1 Paromomycin S. epidermidis ATCC Medium No.1 Polymyxin B Bordetella bronchiseptica ATCC 4617 Medium No.9 Medium No.11 Medium No.5 Medium No.11 Medium No.11 Medium No.2 Medium No.11 Medium No.11 Medium No.9 Medium No.11 Medium No.5 Medium No.11 Medium No.11 Medium No.1 Medium No.11 Medium No.11 Medium No S. aureus ATCC Medium No Klebsiella pneumoniae ATCC Medium No.3 - -

55 ชน ดของยา เช อมาตรฐานท ใช และชน ดอาหารเล ยงเช อท เหมาะสมในการทดสอบ ทางจ ลช วว ทยาก บว ธ ว เคราะห บนว นแบบวาง Cylinder cup และว ธ ว ดความข นของเช อ Antibiotic Cylinder test Turbidmetric test Penicillin, oxacillin, Methicillin, nafcillin Streptomycin, Dihydro-streptomycin Tetracycline, Oxytetracycline Test strain Culture medium Test strain Culture medium Seed Culture Base layer Seed layer S. aureus ATCC 6538 P Medium No.3 B. subtilis ATCC 6633 Medium No.1 B. cereus ATCC Medium No.1 Viomycin B. subtilis ATCC 6633 Medium No.1 Medium No.2 Medium No.5 Medium No.8 Medium No.5 Medium No.11 Medium No.5 Medium No.8 Medium No Klebsiella pneumoniae ATCC S. aureus ATCC 6538 P Medium No.3 Medium No.3 - -

56 แบบการเก ดโซนใส และการแปลผลชน ดยาปฏ ช วนะท พบม ความไว (Sensitivity) ก บเช อท แยกได ก บเช อมาตรฐาน ท ใช ทดสอบ แบบ Sensitivity ท ระด บความเข มข นต าส ดท เก ดโซนใส สารมาตรฐาน B. smithii Isolate 285/1 G. stearothermophilus ATCC 7953 B. subtilis ATCC 6633 B. cereus ATCC K. rhizophila ATCC 9341 B. bronchiseptica ATCC 4617 ยาปฏ ช วนะ Tetracycline Chlortetracycline Oxytetracycline Tylosin Spiramycin Erythromycin Tiamulin Tilmicosin Lincomycin Colistin Amoxicillin Bacitracin Cefquinome sulfate Phiriyayon (2018) 56

57 แบบการเก ดโซนใส และการแปลผลชน ดยาปฏ ช วนะท พบม ความไว (Sensitivity) ก บเช อท แยกได ก บเช อมาตรฐาน ท ใช ทดสอบ (ต อ) แบบ Sensitivity ท ระด บความเข มข นต าส ดท เก ดโซนใส สารมาตรฐาน B. smithii Isolate 285/1 G. stearothermophilus ATCC 7953 B. subtilis ATCC 6633 B. cereus ATCC K. rhizophila ATCC 9341 B. bronchiseptica ATCC 4617 Ceftriaxone sodium Ceftiofur Cefotaxime sodium Nitrofurantoin Nitrofurazone Furaltadone Furazolidone ยาก นบ ด Nigericin Salinomycin Maduramicin Monensin Lasalocid Diclazuril Phiriyayon (2018) 57

58 แบบการเก ดโซนใส และการแปลผลชน ดยาปฏ ช วนะท พบม ความไว (Sensitivity) ก บเช อท แยกได ก บเช อมาตรฐาน ท ใช ทดสอบ (ต อ) แบบ Sensitivity ท ระด บความเข มข นต าส ดท เก ดโซนใส สารมาตรฐาน B. smithii Isolate 285/1 G. stearothermophilus ATCC 7953 B. subtilis ATCC 6633 B. cereus ATCC K. rhizophila ATCC 9341 B. bronchiseptica ATCC 4617 Halofuginone Robenidine Nicarbazin หมายเหต + หมายถ ง ระด บความเข มข นท เก ดโซนใส mg/l หมายถ ง ระด บความเข มข นท เก ดโซนใส 10.0 mg/l + หมายถ ง ระด บความเข มข นท เก ดโซนใส 5.0 mg/l หมายถ ง ระด บความเข มข นท เก ดโซนใส 1.0 mg/l - หมายถ ง ไม เก ดโซนใส (Inhibition zone) Phiriyayon (2018) 58

59 การตรวจว เคราะห ยาและสารต องห ามในอาหารส ตว โดยใช เคร องม อช นส ง ยากล ม Tetracycline สารต องห ามกล ม Nitrofurans ยากล ม Macrolides ยากล ม Sulfonamides ยากล ม Fluoroquinolones ยาก นบ ด (Anticoccidial drugs) สารต องห าม Chloramphenicol Colistin ยากล ม Beta lactams เช น Amoxicillin, Penicillin G, Ceftiofur ยาท อย ระหว างการพ ฒนาว ธ Beta lactam เพ มเต ม กล ม Penicilllins เช น Ampicillin, Cloxacillin, Dicloxacillin, Nafcillin, Oxacillin เป นต น Phiriyayon,

60 เคร องม อช นส งท ใช ในการตรวจว เคราะห ยาและสารต องห ามในอาหารส ตว LC-MS/MS LC-HRMS/MS GC-MS/MS HPLC Phiriyayon,

61 ยากล ม Tetracyclines Chlortetracycline Oxytetracycline Doxycycline ยากล ม Sulfonamides Sulfamethazine Sulfadimethoxine ยากล ม Macrolides Tylosin Tilmicosin Erythromycin สารต องห ามกล มNitrofurans Nitrofurazone Furazolidone Furaltadone Nitrofurantoin ยากล ม Fluoroquinolones Ciprofloxacin Cinoxacin Danofloxacin Difloxacin Enoxacin Enrofloxacin Flumequine Marbofloxacin Norfloxacin Nalidixic acid Orbifloxacin Oxolinic acid Sarafloxacin Maloxacin Ofloxacin ยากล ม Polymycins Colistin Phiriyayon, 2018 ยาก นบ ด Decoquinate Diclazuril Halofuginone Lasalocid Maduramicin Monensin Narasin Nicarbazin Nigericin Robinidine Salinomycin Toltrazuril ยากล ม Beta-lactams Amoxicillin Penicillin G Ceftiofur 61

62 การว เคราะห ยากล ม Tetracyclines ในอาหารส ตว Antibiotic Chlortetracycline, Oxytetracycline, Doxycycline Screening method>>> Colorimetric method Determination and Confirmation method>>> HPLC Phiriyayon,

63 ว ธ ว เคราะห ยากล ม Tetracyclines ในอาหารส ตว (Carry over) Sample 10 g Extraction 0.1 M HCL in MeOH 50 ml, Shake 30 min, Centrifuge 5 min, 3,500 rpm, Dilute with H 2 O (1:1) Clean up with SPE (SCX) (Condition with MeOH and H 2 O, Wash with 0.05 M HCl in MeOH, Elute with 0.4 M HCl in MeOH) Adjust volume, Inject 30 µl to HPLC (C 8, mm, 5 µm, 0.5 ml/min, 30 min, UV 365 nm) Reference: In house method base on Journal of Chromatography Phiriyayon, A 2018 Vol.1088, (2005) P

64 ว ธ ว เคราะห ยากล ม Tetracyclines ในอาหารส ตว (Medicated feed) Sample 2 g Extraction 0.1 M HCL in MeOH 100 ml, Shake 30 min, Centrifuge 5 min, 3,500 rpm, Dilute with H 2 O (1:1) Clean up with SPE (SCX) (Condition with MeOH and H 2 O, Wash with 0.05 M HCl in MeOH, Elute with 0.4 M HCl in MeOH) Adjust volume, Inject 30 µl to HPLC (C 8, mm, 5 µm, 0.5 ml/min, 30 min, UV 365 nm) Reference: In house method base on Journal of Chromatography Phiriyayon, 2018 A Vol.1088, (2005) P

65 ว ธ ว เคราะห สารต องห ามกล ม Nitrofurans ในอาหารส ตว Sample 10 g Extraction with H 2 O : ACN, Shake 30 min, Centrifuge 5 min at 3,500 rpm Clean up with SPE (Alumina column), Evaporate (remain approx. 5 ml ) Liquid-Liquid Extraction (LLE) with Hexane discard fat layer, LLE with Ethyl acetate collect clear layer Evaporate (dry), Add 0.1 % Formic acid, inject 20 µl to LC- MS/MS (Inertsil C 18, 5 µm, mm, 0.2 ml/min, 16 min, solventa=0.1% Formic aid, solvent B Acetonitrile) Phiriyayon, 2018 Reference: modify from ISO (F)P

66 ว ธ ว เคราะห สารต องห าม Chloramphenicol ในอาหารส ตว Sample 10 g Extraction with H 2 O : ACN, Shake 30 min, Centrifuge 5 min, 3,500 rpm Clean up with SPE (Alumina column), Evaporate (remain approx. 5 ml ) LLE with Hexane discard fat layer, LLE with Ethyl acetate collect clear layer Evaporate (dry), Add 0.01 M Ammonium acetate, inject 20 µl to LC- MS/MS (C 18, 0.2 ml/min, 15 min) Phiriyayon, 2018 Reference: modify from ISO (F)P

67 ประส ทธ ภาพการตรวจว เคราะห ยาและสารต องห ามในอาหารส ตว ป 2562 ลาด บ รายการ ขอบข าย ว ธ ว เคราะห ระยะเวลาท ใช (ว น) 1 Screening test ชน ดยา -Nitrofurazone -Nitrofurantoin -Furazolidone -Furaltadone -Nitrovin -Zoalene -Roxarzone -Chlortetracycline -Oxytetracycline -Carbadox 2 หาสารปฏ ช วนะโดยว ธ เบ องต นทางจ ลช วว ทยา (Inhibitory microbiological assay) อาหารส ตว อาหารเสร ม สารผสมล วงหน า นมและผล ตภ ณฑ นม ส าหร บส ตว ว ตถ ด บอาหารส ตว อาหารส ตว ผสมส าเร จร ป - อาหารส ตว ผสมส าเร จร ป - ไก ฟาร มมาตรฐาน (a) - อาหารส ตว ผสมส าเร จร ปอ นๆ In house method Based on AOAC (1980) In house method based on Feed Additive Compendium, 1985 In house method based on Microbiological assay technique จ านวน ต.ย./คร ง LOD/LOQ 10/- (mg/kg) /- (mg/kg)

68 ประส ทธ ภาพการตรวจว เคราะห ยาและสารต องห ามในอาหารส ตว ป 2562 ลาด บ รายการ ขอบข าย ว ธ ว เคราะห ระยะเวลา ท ใช (ว น) 3 Beta-agonists - Salbutamol - Clenbuterol - Ractopamine 4 Nitrofurans - Nitrofurazone - Furazolidone - Furaltadone - Nitrofurantoin อาหารส ตว อาหารส ตว - อาหารส กร (a) - อาหารส ตว อ นๆ อาหารส ตว - ELISA (Sal, Clen, Rac): Document of ELISA test kit - LC-MS/MS (Sal,Clen,Rac): In house method - based on Anal Chemica Acta 483(2003) p LC-MS/MS : In house method based on Journal of Chromatography A, 1997, Vol.771, p ) จ านวน ต.ย./คร ง LOD/LOQ ELISA Salbutamol =3/10 (µg/kg) Clenbuterol =3/10 (µg/kg) Ractopamine =4/10 (µg/kg) LC-MS/MS Salbutamol =0.02/0.05 (mg/kg) Clenbuterol =0.02/0.05 (mg/kg) Ractopamine =0.02/0.05 (mg/kg) Nitrofurazone =50/100 (µg/kg) Furazolidone =50/100 (µg/kg) Furaltadone =30/50 (µg/kg) Nitrofurantoin =50/100 (µg/kg) 5 Chloramphenicol อาหารส ตว - CHARM II :Document of CHARM II test kit - LC-MS/MS : In house method base on Anal.Chim.acta 483, 2003, p CHARM II =5/16 (µg/kg) LC-MS/MS =0.02/0.06 (mg/kg)

69 ประส ทธ ภาพการตรวจว เคราะห ยาและสารต องห ามในอาหารส ตว ป 2562 ลาด บ รายการ ขอบข าย ว ธ ว เคราะห ระยะเวลา ท ใช (ว น) 6 Nitroimidazoles - Dimetridazole - Ronidazole - Metronidazole 7 Macrolides - Tylosin - Tilmicosin - Erythromycin อาหารส ตว - อาหารส กร (a) - อาหารส ตว อ น ๆ อาหารส ตว -LC-MSMS : In house method based on CHEMIJA Vol.18 (2007) p and Journal of Chromatography A Vol.882 (2000) p CHARM II : Document of CHARM II test kit - LC-MS/MS : In house method based on Anal.Chim.acta 492, 2003, p Tiamulin อาหารส ตว - LC-MS/MS : In house method based on Anal.Chim.acta 492, 2003, p Lincomycin อาหารส ตว - LC-MS/MS : In house method based on Anal.Chim.acta 492, 2003, p Olaquindox อาหารส ตว -LC-MS/MS : In house method based on - อาหารส กร (a) CHEMIJA Vol.18 (2007) p and - อาหารส ตว อ น ๆ Journal of Chromatography A Vol Sulfonamides - Sulfamethazine -Sulfadimethoxine อาหารส ตว (2000) p LC-MS/MS : In house method base on J.AOAC,Vol 85, No.1, 2002, p จ านวน ต.ย./คร ง LOD/LOQ (mg/kg) / CHARM II =2/7 LC-MS/MS =0.02/ / / / CHARM II = 0.2/0.6 LC-MS/MS =0.009/0.03

70 ประส ทธ ภาพการตรวจว เคราะห ยาและสารต องห ามในอาหารส ตว ป 2562 ลาด บ รายการ ขอบข าย ว ธ ว เคราะห ระยะเวลาท ใช (ว น) จ านวน ต.ย./คร ง LOD/LOQ (mg/kg) 12 Carbadox อาหารส ตว - อาหารส กร (a) - อาหารส ตว อ น ๆ -LC-MS/MS : In house method based on Animal feeding stuffs, ISO , p / Fluoroquinolones -Ciprofloxacin -Cinoxacin -Danofloxacin -Difloxacin - Enoxacin -Enrofloxacin -Flumequine -Marbofloxacin -Norfloxacin -Nalidixic acid -Orbifloxacin -Oxolinic acid -Sarafloxacin -Maloxacin -Ofloxacin อาหารส ตว -LC-MS/MS : In house method based on Anal Chim.acta 483(2003) p /0.05

71 ประส ทธ ภาพการตรวจว เคราะห ยาและสารต องห ามในอาหารส ตว ป 2562 ลาด บ รายการ ขอบข าย ว ธ ว เคราะห ระยะเวลาท ใช (ว น) 14 Tetracyclines - Chlortetracycline - Oxytetracycline - Doxycycline 15 Anticoccidial substance -Decoquinate -Diclazuril -Halofuginone -Lasalocid -Maduramicin -Monensin -Narasin -Nicarbazin -Nigericin -Robinidine -Salinomycin -Toltrazuril อาหารส ตว (a) อาหารส ตว ว ตถ ด บอาหารส ตว -HPLC: In house method based on Journal of Chromatography A, Volume1088, Issue 1-2, 2005 p LC-MS/MS : In house method - based on Journal of Chromatography B 813, 2004 p จ านวน ต.ย./คร ง LOD/LOQ (mg/kg) 0.3/ / /1.0 -/- -/- -/- -/- 0.03/0.05 -/- -/- 0.01/ /0.05 -/- 0.03/0.05 -/-

72 ประส ทธ ภาพการตรวจว เคราะห ยาและสารต องห ามในอาหารส ตว ป 2562 ลาด บ รายการ ขอบข าย ว ธ ว เคราะห ระยะเวลาท ใช (ว น) 16 Polymyxins -Colistin 17 Beta-lactams -Amoxicillin -Penicillin G -Ceftiofur อาหารส ตว ว ตถ ด บอาหารส ตว อาหารส ตว ว ตถ ด บอาหารส ตว - ELISA : Document of ELISA test kit - LC-MS/MS :In house method - based on Journal of Chromatography B 878 (2010) p ) - CHARM II : Document of CHARM II test kit) - LC-MS/MS : In house method base on Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 85, 2013, p จ านวน ต.ย./คร ง LOD/LOQ (mg/kg) 0.05/- -/- 0.50/- 0.05/0.08

73 การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ สารกล ม Tetracycline ในอาหารไก โดยว ธ HPLC รายการ ชน ด ว ตถ ด บ Linearity range ของ Calibration curve Working/ Linearity range ของว ธ ทดสอบ Method validation LOD LOQ Accuracy %Recovery Precision (Repeatability) %RSD Precision (reproducibility) %RSD Uncertainty OTC อาหาร ไก R 2 = ( µg/ml) R 2 = (1 300 mg/kg 0.3 mg/kg 1 mg/kg % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) 1.05 ± 0.39 mg/kg ท ระด บความ เช อม น 95% CTC R 2 = ( µg/ml) R 2 = (1 300 mg/kg) 0.5 mg/kg 1 mg/kg % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) DXC R 2 = ( µg/ml) R 2 = (1 300 mg/kg) 0.5 mg/kg 1 mg/kg % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) Phiriyayon,

74 การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ สารกล ม Tetracyclines ในอาหารส กรโดยว ธ HPLC รายการ ชน ด ว ตถ ด บ Linearity range ของ Calibration curve Working/ Linearity range ของว ธ ทดสอบ Method validation LOD LOQ Accuracy %Recovery Precision (Repeatability) %RSD Precision (Reproducibility) %RSD Uncertainty OTC อาหาร ส กร R 2 = 1 ( µg/ml) CTC R 2 = ( µg/ml) R 2 = (1 300 mg/kg) R 2 = (1 300 mg/kg) 0.3 mg/kg 0.5 mg/kg 1 mg/kg 1 mg/kg % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) 1.05 ± 0.39 mg/kg ท ระด บความ เช อม น 95% DXC R 2 = ( µg/ml) R 2 = (1 300 mg/kg) 0.5 mg/kg 1 mg/kg % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) % (1-300 mg/kg) Phiriyayon,

75 การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ สารกล ม Beta agonists ในอาหารส ตว โดยว ธ LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry รายการ ชน ด ว ตถ ด บ Linearity range ของ Calibration curve Working/ Linearity range ของว ธ ทดสอบ Method validation LOD LOQ Accuracy %Recovery Precision (Repeatability) %RSD Precision (reproducibility) %RSD Uncertainty Salbutamol อาหารส ตว - R 2 = ( mg /kg) 0.02 mg/k g 0.05 mg/kg % % % 0.73 ± 0.11 mg/kg ท ระด บ ความเช อม น 95 % Clenbuterol - R2 = 9994 ( mg /kg) 0.02 mg/k g 0.05 mg/kg % % % 0.77 ± 0.10 mg/kg ท ระด บ ความเช อม น 95 % Ractopamine - R2 = ( mg /kg) 0.02 mg/k g 0.05 mg/kg % % % 0.72 ± 0.10 mg/kg ท ระด บ ความเช อม น 95 % Phiriyayon,

76 การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ การตรวจสอบความใช ได ของว ธ ทดสอบสาร Carbadox ในอาหารส ตว โดยว ธ LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry รายการ ชน ด ว ตถ ด บ Linearity range ของ Calibration curve Working/ Linearity range ของว ธ ทดสอบ Carbadox อาหารส ตว - R 2 = (40-1,000 µg /kg) Method validation LOD LOQ Accuracy %Recovery 12 µg/kg 40 µg/kg Precision (Repeatability) %RSD Precision (Reproducibilit y) %RSD Uncertainty % % % 0.49 ± 0.13 mg/kg ท ระด บความ เช อม น 95 % Phiriyayon,

77 การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ สารกล ม Nitroimidazoles และ Olaquindox ในอาหารส ตว โดยว ธ LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry รายการ ชน ด ว ตถ ด บ Linearity range ของ Calibration curve Working/ Linearity range ของว ธ ทดสอบ Method validation LOD LOQ Accuracy %Recovery Precision (Repeatability) %RSD Precision (reproducibility) %RSD Uncertainty Dimetri dazole อาหาร ส ตว - R 2 = ( mg/ml) mg/kg mg/kg % % % 1.87 ± 0.41 mg/kg ท ระด บความ เช อม น 95% Metroni dazole - R 2 = ( mg/ml) mg/kg mg/kg % % % 1.86 ± 0.34 mg/kg ท ระด บความ เช อม น 95% Ronida zole - R 2 = ( mg/ml) mg/kg mg/kg % % % 1.97 ± 0.42 mg/kg ท ระด บความ เช อม น 95% Phiriyayon,

78 การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ การตรวจสอบความใช ได และค าความไม แน นอนของว ธ ทดสอบ Olaquindox ในอาหารส ตว โดยว ธ LC-MS/MS Triple Quadrupole Mass Spectrometry รายการ ชน ด ว ตถ ด บ Linearity range ของ Calibration curve Working/ Linearity range ของว ธ ทดสอบ Method validation LOD LOQ Accuracy %Recovery Precision (Repeatability) %RSD Precision (reproducibility) %RSD Uncertainty Olaquin dox อาหาร ส ตว - R 2 = ( mg/ml) mg/kg mg/kg % % % 2.00 ± 0.35 mg/kg ท ระด บความ เช อม น 95% Phiriyayon,

79 การควบค มค ณภาพภายในผลการทดสอบ รายการทดสอบ รายการควบค มค ณภาพภายใน ความถ Beta Agonists - Salbutamol - Clenbuterol - Ractopamine in Feed (swine) 1. ทดสอบ Positive control (Spike sample ท 0.10 mg/kg) 1.1 %Recovery เกณฑ การยอมร บ : อย ในช วง % 1.2 %RPD เกณฑ การยอมร บ : ไม เก น 15% 2. ทดสอบ Negative Control 2.1 Reagent Blank เกณฑ การยอมร บ : ไม พบ 2.2 Sample Blank เกณฑ การยอมร บ : ไม พบ หร อพบน อยกว า LOD 3. ทา Duplicate 3.1 กรณ ต วอย างทดสอบไม ผ านการทดสอบด วยว ธ ค ดกรองมาก อน 3.2 กรณ ต วอย างทดสอบผ านการทดสอบด วยว ธ ค ดกรองมาก อน 3.3 %RPD เม อต วอย างม ความเข มข นอย ในช วง 0.05 ถ ง 0.10 mg/kg เกณฑ การยอมร บ : ไม เก น 30% 3.4 %RPD เม อต วอย างม ความเข มข นอย ในช วง 0.10 ถ ง 2.00mg/kg เกณฑ การยอมร บ : ไม เก น 20% 4. ทา Control Chart เกณฑ การยอมร บ : อย ในช วง LCL ถ ง UCL - 2 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - 1 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - 1 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - ท กๆ 10 ต วอย าง - ท กต วอย าง - ท กช ดการทดสอบ - ท กคร งก อนการทดสอบ Phiriyayon,

80 การควบค มค ณภาพภายในผลการทดสอบ รายการทดสอบ รายการควบค มค ณภาพภายใน ความถ Beta Agonists - Salbutamol - Clenbuterol - Ractopamine in Feed (swine) 5. ตรวจสอบประส ทธ ภาพเคร อง LC-MS/MS ก อนการใช งาน (System Suitability) 5.1 %RPD of peak area เกณฑ การยอมร บ : น อยกว า %RPD of RT เกณฑ การยอมร บ : น อยกว า 1 6. ทดสอบ Peak area drift ของสารละลายมาตรฐาน เกณฑ การยอมร บ : ไม เก น ±30% 7. Standard calibration curve เกณฑ การยอมร บ : R 2 ไม น อยกว า เฝ าระว งท ระด บค า LOD และ LOQ 8.1 LOQ พ จารณาค า % Recovery และ % RSD เกณฑ การยอมร บ : % Recovery = และ % RSD ไม เก น 15% 8.2 LOD พ จารณา ค า S/N และ %lon ratio เกณฑ การยอมร บ : ไม น อยกว า 3 และ %lon ratio พ จารณาตามเกณฑ (European commission decision 2002/657/EC) - ท กช ดการทดสอบ - ท กช ดการทดสอบ - ท ก 6 เด อน Phiriyayon,

81 การควบค มค ณภาพภายในผลการทดสอบ รายการทดสอบ รายการควบค มค ณภาพภายใน ความถ Tetracycline - Chlortetracycline - Oxytetracycline - Doxycycline in Feed 1. ทดสอบ Positive control (Spike sample ท 1.00 mg/kg) 1.1 %Recovery เกณฑ การยอมร บ : อย ในช วง % 1.2 %RPD เกณฑ การยอมร บ : ไม เก น 11% 2. ทดสอบ Negative Control 2.1 Reagent Blank เกณฑ การยอมร บ : ไม พบ 2.2 Sample Blank เกณฑ การยอมร บ : ไม พบ หร อพบน อยกว า LOD 3. ทา Duplicate เกณฑ การยอมร บ : %RPD ไม เก น 20% 4. ทา Control Chart เกณฑ การยอมร บ : อย ในช วง LCL ถ ง UCL 5. ตรวจสอบประส ทธ ภาพเคร อง LC-MS/MS ก อนการใช งาน(System Suitability) 5.1 %RPD of peak area เกณฑ การยอมร บ : น อยกว า %RPD of RT เกณฑ การยอมร บ : น อยกว า 1 6. ทดสอบ Peak area drift ของสารละลายมาตรฐาน เกณฑ การยอมร บ : ไม เก น ±10% 7. Standard calibration curve เกณฑ การยอมร บ : R 2 ไม น อยกว า เฝ าระว งท ระด บค า LOD พ จารณา ค า S/N เกณฑ การยอมร บ : ไม น อย กว า 3-2 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - 1 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - 1 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - ท กต วอย าง - ท กช ดการทดสอบ - ท กคร งก อนการทดสอบ - ท กช ดการทดสอบ - ท กช ดการทดสอบ - ท ก 6 เด อน Phiriyayon,

82 การควบค มค ณภาพภายในผลการทดสอบ รายการทดสอบ รายการควบค มค ณภาพภายใน ความถ Carbadox (swine feed) 1. ทดสอบ Positive control (Spike sample ท ระด บ LOQ) 1.1 %Recovery เกณฑ การยอมร บ : อย ในช วง % 1.2 %RPD เกณฑ การยอมร บ : ไม เก น 15% 2. ทดสอบ Negative Control 2.1 Reagent Blank เกณฑ การยอมร บ : ไม พบ 2.2 Sample Blank เกณฑ การยอมร บ : ไม พบ หร อพบน อยกว า LOD 3. ทา Duplicate 3.1 %RPD เม อต วอย างม ความเข มข นอย ในช วง 0.04 ถ ง 0.10 mg/kg เกณฑ การยอมร บ : %RPD ไม เก น 30% 3.2 %RPD เม อต วอย างม ความเข มข นอย ในช วง >0.10 ถ ง mg/kg เกณฑ การยอมร บ : %RPD ไม เก น 20% 4. ทา Control Chart เกณฑ การยอมร บ : อย ในช วง LCL ถ ง UCL 5. ตรวจสอบประส ทธ ภาพเคร อง LC-MS/MS ก อนการใช งาน(System Suitability) 5.1 %RPD of peak area เกณฑ การยอมร บ : น อยกว า %RPD of RT เกณฑ การยอมร บ : น อยกว า 1 6. ทดสอบ Peak area drift ของสารละลายมาตรฐาน เกณฑ การยอมร บ : ไม เก น ±30% 7. Standard calibration curve เกณฑ การยอมร บ : R 2 ไม น อยกว า เฝ าระว งท ระด บค า LOD พ จารณา ค า S/N เกณฑ การยอมร บ : ไม น อยกว า 3 และ %lon ratio พ จารณาตามเกณฑ (European commission decision 2002/657/EC) - 2 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - 1 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - 1 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - ท ก 10 ต วอย าง - ท กช ดการทดสอบ - ท กคร งก อนการทดสอบ - ท กช ดการทดสอบ - ท กช ดการทดสอบ - ท ก 6 เด อน Phiriyayon,

83 การควบค มค ณภาพภายในผลการทดสอบ รายการทดสอบ รายการควบค มค ณภาพภายใน ความถ Nitroimidazoles (swine feed) -Dimetridazole -Metronidazole -Ronidazole Olaquindox (swine feed) 1.ทดสอบ Positive control (Spike sample ท ระด บ LOQ) 1.1 %Recovery เกณฑ การยอมร บ : อย ในช วง % 1.2 %RPD เกณฑ การยอมร บ : ไม เก น 15% 2.ทดสอบ Negative Control 2.1 Reagent Blank เกณฑ การยอมร บ : ไม พบ 2.2 Sample Blank เกณฑ การยอมร บ : ไม พบ หร อ พบน อยกว า LOD 3.ทา Duplicate 3.1 %RPD เม อต วอย างม ความเข มข นอย ในช วง 0.05 ถ ง 0.10 mg/kg เกณฑ การยอมร บ : %RPD ไม เก น 30% 3.2 %RPD เม อต วอย างม ความเข มข นอย ในช วง >0.10 ถ ง 2.00 mg/kg เกณฑ การยอมร บ : %RPD ไม เก น 20% 4.ทา Control Chart เกณฑ การยอมร บ : อย ในช วง LCL ถ ง UCL 5. ตรวจสอบประส ทธ ภาพเคร อง LC-MS/MS ก อนการใช งาน(System Suitability) 5.1 %RPD of peak area เกณฑ การยอมร บ : น อยกว า %RPD of RT เกณฑ การยอมร บ : น อยกว า 1 6.ทดสอบ Peak area drift ของสารละลายมาตรฐาน เกณฑ การยอมร บ : ไม เก น ±30% 7.Standard calibration curve เกณฑ การยอมร บ : R2 ไม น อยกว า เฝ าระว งท ระด บค า LOD พ จารณา ค า S/N เกณฑ การยอมร บ : ไม น อยกว า 3 และ %lon ratio พ จารณาตามเกณฑ (European commission decision 2002/657/EC) - 2 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - 1 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - 1 ต วอย าง/ช ดการทดสอบ - ท ก 10 ต วอย าง - ท กช ดการทดสอบ - ท กคร งก อนการทดสอบ - ท กช ดการทดสอบ - ท กช ดการทดสอบ - ท ก 6 เด อน Phiriyayon,

84 ห องปฏ บ ต การทดสอบและสอบเท ยบตามมาตรฐาน ISO/IEC 17025:2017 ข อกาหนดท วไปว าด วยความสามารถของห องปฏ บ ต การทดสอบ และห องปฏ บ ต การสอบเท ยบ ISO/IEC17025: Scope 2. Normative references 3. Terms and definitions 4. General requirement 5. Structural requirements 6. Resource requirements 7. Process requirements 8. Management system requirements Phiriyayon, 2018

85 ตารางเปร ยบเท ยบข อกาหนด ISO17025:2017 และ Structural requirements (ข อกาหนดด านโครงสร าง) ISO 17025:2017 ISO 17025: Legal, responsible (ห องปฏ บ ต การต องเป นน ต บ คคลหร อเป นส วนหน งท ระบ ไว ของ น ต บ คคลท ร บผ ดชอบก จกรรมห องปฏ บ ต การของตน) 5.2 Management responsibility (ห องปฏ บ ต การต องกาหนดผ บร หารท ร บผ ดชอบ โดยรวมของห องปฏ บ ต การ) 5.3 Range of activities (ห องปฏ บ ต การต องกาหนดและทาเอกสารช วงของก จกรรมต างๆ ของห องปฏ บ ต การท ต องสอดคล องก บเอกสาร ISO ฉบ บน ) 5.4 Lab activities meet the requirements of the standard & stakeholders and applied at all work location (ก จกรรมต างๆของ ห องปฏ บ ต การต องดาเน นการเพ อให เป นไปตามข อกาหนดของเอกสาร ISO ฉบ บน ล กค า ห องปฏ บ ต การ หน วยงานกาก บด แลและองค กรท ให การยอมร บ รวมถ งก จกรรมต างๆของ ห องปฏ บ ต การท ทาในส งอานวยความสะดวกแบบถาวรท งหมด (ในสถานท ต ง) ในท ห างไกล จากสถานท ต ง ในสถานท ช วคราวหร อเคล อนท หร อท สถานท ของล กค า) (h) 4.2.1, et al 4.1.2, Phiriyayon, 2018 Dusadee, 2018

86 ตารางเปร ยบเท ยบข อกาหนด ISO17025:2017 และ Structural requirements (ข อกาหนดด านโครงสร าง) ISO 17025:2017 ISO 17025: Define structure: specify responsibilities and authorities; document procedures for consistency (กาหนดโครงสร างองค กรและการ จ ดการห องปฏ บ ต การ ระบ ความร บผ ดชอบ และจ ดทาเอกสารข นตอนต างๆในขอบเขตท จ าเป น) 4.1.5(e)(f), Personnel follow PDCA to carry out duties 4.1.5(a)(l), 4.2.2(e), Integrity & communication of MS (ม การส อสารเก ยวก บประส ทธ ผลของ ระบบการบร หารงานและส อสารเก ยวก บความส าค ญของการตอบสนองความต องการของล กค า และความต องการต างๆ ท นอกเหน อจากความต องการของล กค า) 4.2.7, 4.1.6, Phiriyayon, 2018

87 ISO 17025:2017 ISO 17025: Resource requirements (ข อกาหนดด านทร พยากร) 6.1 General (ท วไป) 6.2 Personnel (บ คลากร) 4.1.5(d)(g)(k), 4.2.1, 4.2.4, 4.3.1, 5.2, 5.4.3, Facilities and environmental conditions (สถานท และสภาพแวดล อม) ตารางเปร ยบเท ยบข อกาหนด ISO17025:2017 และ , 5.3.1, 5.3.2, 5.3.4, (c) 6.4 Equipment (อ ปกรณ ) 5.4.1, (a), 5.5, 5.6.1, , Metrological traceability (การตรวจสอบย อนกล บ ทางมาตรว ทยา) 6.6 Externally provided products and services (5.6) (4.6) (ผล ตภ ณฑ และบร การจากภายนอก) Phiriyayon, 2018

88 ตารางเปร ยบเท ยบข อกาหนด ISO17025:2017 และ Process requirements (ข อกาหนดด านกระบวนการ) ISO 17025:2017 ISO 17025: Review of requests, tenders and contracts (การทบทวนคาขอ การประม ล และข อส ญญา) 7.2 Selection, verification and validation of methods (การค ดเล อก การ ทวนสอบและการตรวจสอบความถ กต องของว ธ ) 4.4, 4.5.2, Sampling (การช กต วอย าง) Handling of test or calibration items (การจ ดการต วอย างทดสอบหร อสอบ เท ยบ) 7.5 Technical records (บ นท กทางด านว ชาการ) Evaluation of measurement uncertainty (การประเม นความไม แน นอนของ การว ด) Ensuring the validity of results (ความม นใจในความถ กต องของผลต างๆ) 5.9, Reporting of results (การรายงานผล) 5.10, , , 4.13 Phiriyayon, 2018 Dusadee, 2018

89 ตารางเปร ยบเท ยบข อกาหนด ISO17025:2017 และ 2005 ISO 17025:2017 ISO 17025: Complaints (ข อร องเร ยน) Nonconforming work (งานท ไม เป นไปตามข อกาหนด) Control of data and information management (การควบค ม ข อม ลและการจ ดการข อม ล) 4.13, Phiriyayon, 2018 Dusadee, 2018

90 ตารางเปร ยบเท ยบข อกาหนด ISO17025:2017 และ Management system requirements (ข อกาหนดของระบบการจ ดการ) ISO 17025:2017 ISO 17025: Options (ข อเสนอทางเล อก) General (ท วไป) Option A (ทางเล อก ก) ระบบการบร หารงานของห องปฏ บ ต การต องม การระบ ถ งส งต อไปน - เอกสารระบบการบร หารงาน - การควบค มเอกสารระบบการบร หารงาน - การควบค มบ นท ก - การปฏ บ ต การในการระบ ความเส ยงและโอกาส - การปร บปร ง - การปฏ บ ต การแก ไข - การตรวจต ดตามค ณภาพภายใน - การทบทวนการบร หารงาน Option B (ทางเล อก ข) ห องปฏ บ ต การท ม การจ ดทาและร กษาระบบการบร หารงานตามข อกาหนดของ ISO 9001 และม ความสามารถ ในการสน บสน นและแสดงให เห นถ งการปฏ บ ต ตามข อกาหนดข อ 4 ถ งข อ 7 อย างสม าเสมอ จะถ อว าม ความ ครบถ วนน อยท ส ดของข อกาหนดระบบการบร หารงานตามท ระบ ไว ในข อ 8.2 ถ ง Management system documentation (Option A) (เอกสารข อม ลระบบการจ ดการ (ทางเล อก ก)) Phiriyayon, 2018 New New 4.2 Dusadee, 2018

91 ตารางเปร ยบเท ยบข อกาหนด ISO17025:2017 และ 2005 ISO 17025:2017 ISO 17025: Management system requirements (ข อกาหนดของระบบการจ ดการ) 8.3 Control of management system documents (Option A) (การควบค ม เอกสารระบบการจ ดการ (ทางเล อก ก)) 8.4 Control of records (Option A) (การควบค มบ นท ก (ทางเล อก ก)) Actions to address risks and opportunities (Option A) (การปฏ บ ต ในการ จ ดการความเส ยงและโอกาส (ทางเล อก ก)) 8.6 Improvement (Option A) (การปร บปร ง (ทางเล อก ก)) Corrective action (Option A) (การปฏ บ ต การแก ไข (ทางเล อก ก)) Internal audits (Option A) (การตรวจต ดตามค ณภาพภายใน (ทางเล อก ก)) Management reviews (Option A) (การทบทวนการบร หารงาน (ทางเล อก ก)) New Phiriyayon, 2018

92 ส งท ส าค ญก บการทดสอบ บ คลากร การประก น ค ณภาพฯ สถานท และ สภาวะแวดล อม ว ธ ทดสอบ สอบเท ยบฯ ความสอบกล บได ของการว ด เคร องม อ Phiriyayon,

93 การประก นค ณภาพการทดสอบ (Quality assurance) Instrument (calibration) Persons (training) Laboratory Instrument (maintenance) Audit & Review Phiriyayon,

94 การควบค มค ณภาพการทดสอบ Internal Quality Control ตรวจสอบประส ทธ ภาพของเคร องม อ ทดสอบต วอย างควบค ม (Quality Control sample, QC sample) External Quality Control การทดสอบความช านาญ (Proficiency Testing, PT) Internal Quality Control Quality Control External Quality Control การเปร ยบเท ยบผลว เคราะห ระหว างห องปฏ บ ต การ (Inter-laboratory comparison) Phiriyayon,

95 ความส าค ญของการควบค มค ณภาพการทดสอบ เพ มความเช อม นในผลว เคราะห ทดสอบ ช ให เห นถ งป ญหา น ามาซ งการปร บปร งและแก ไข เป นไปตามข อกาหนดของมาตรฐาน ISO/IEC 17025:2005 Phiriyayon,

96 Acceptable Recovery Limits Concentration Recovery Limits (%) 100% % % % % µg/g (ppm) µg/g (ppm) µg/kg (ppb) ท มา: AOAC International Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods Phiriyayon,

97 Analytical Variations (AV) in [%]; x= analyte concentration Analyte AV% Moisture (Dry Mass) 12 Protein 20/x+2 Fat 10 Crude Fibre 30/x+6 Ash 45/x+3 Total sugars as invert 12 Calcium 10 Phosphorus 3/x+8 Salt 7/x+5 Vitamin A 30 ท มา: Association of American Control Officials 2011, Official Publication 2011, page Phiriyayon,

98 ป จจ ยท ม ผลต อการว เคราะห ยา 1. ต วอย างต องม ความเป นเน อเด ยวก น 2. การเก บต วอย างต องไม ก อให เก ดการปนเป อนข ามก น 3. ต วอย างต องเก บไว ท อ ณหภ ม เหมาะสม ไม ถ กแสงและไม อ บช น 4. ประว ต ต วอย างท ผสมยาควรม การระบ ให ช ดเจน หากเป น medicated feeds และควรม ใบส งแพทย กาก บมาพร อมใบส งต วอย าง หากเป นไปได 5. ระม ดระว งเร องการสล บต วอย าง Phiriyayon,

99 มาตรฐานการเก บต วอย างอาหารส ตว ด วยเทคน คพ เศษส าหร บส งตรวจรายการว เคราะห ท จาเพาะ รายการว เคราะห ว ธ การเก บต วอย าง 1. ด านจ ลช วว ทยา เช น ต วอย างต องเก บแบบเทคน คปลอดเช อ แล วห อด วยถ งกระดาษท บแสงอ ก 1 ช น ใช ถ งพลาสต กใหม เช อซ ลโมเนลลา ปร มาณแบคท เร ย และต องฆ าเช อท ภาชนะและม อของผ ปฏ บ ต งานด วย Alcohol 70% และภาชนะต องไม ม รอยทะล ให และปร มาณเช อรา อากาศภายนอกเข าส มผ สได หากเป นไปได ควรเก บแยกถ งเพ มข นอ ก 1 ต วอย าง หากต องว เคราะห ร วมก บรายการอ น 2. ว ตาม น ยา ต องทาการเก บต วอย างโดยระม ดระว งการปนเป อนข ามระหว างต วอย าง และต องใช ถ งพลาสต กใหม และห อด วยถ งกระดาษท บแสง อ ก1 ช น เพ อป องก นแสงท ทาให ยาและว ตาม นเส อมค ณภาพได 3. สารพ ษจากเช อรา การเก บต วอย างเข าห องปฏ บ ต การต องไม น อยกว า 500 กร ม โดยต องส มต วอย าง ให กระจายเป น ต วแทนอย างท วถ ง และน ามาคล กเคล าให เข าก นด แบ งเป น 3 ส วน เพ อจะได ผลว เคราะห ท เป น ต วแทนต วอย างท งหมด หากต วอย างน อยกว า 500 กร ม จะไม เพ ยงพอในการว เคราะห และการตรวจ จนได ค าปร มาณหากเก ดตรวจพบ เพราะต องทาการตรวจเบ องต นและหาปร มาณด วยเคร อง HPLC 4. รายการว เคราะห ในก จกรรม ให แยกเร องแยกก จกรรมและเข ยนในหน งส อต นเร องให ช ดเจนว าต องการให ว เคราะห ในรายการอะไร ร องเร ยน ดาเน นคด ย ด อาย ด ย นย น และไม ควรรวมไว ก บเร องการเก บต วอย างส มตรวจตามปกต เพราะจะทาให เร องม จานวนต วอย าง ผลด านปร มาณ หร อทดสอบ มากและว เคราะห หลายรายการทาให การตอบผลต องรอก น ทาให ล าช าได ประส ทธ ภาพการว เคราะห ท กรายการ หมายเหต ต วอย างอาหารส ตว ท กชน ดต องเก บในท ม ด ห ามถ กแสงและความร อนและความช น เพราะ จะทาให ค าปร มาณสารเปล ยนแปลงและเส อมลงได หากม ต เย นควรเก บท อ ณหภ ม 4 o C จะเก บได นานข น ยกเว น ต วอย าง Aflatoxin ควรเก บท อ ณหภ ม -20 o C Phiriyayon,

100 สร ปการเล อกใช ห องปฏ บ ต การทดสอบ ตามลาด บ 1. การได ร บการร บรองความสามารถห องปฏ บ ต การทดสอบและ ห องปฏ บ ต การสอบเท ยบตามมาตรฐาน ISO/IEC การทดสอบความช านาญ (Proficiency testing, PT) ท งภายใน/ต างประเทศ 3. การทดสอบ Ring test 4. การเปร ยบเท ยบผลทดสอบระหว าง 2 ห องปฏ บ ต การหร อมากกว า 5. การตรวจสอบความใช ได ของว ธ ทดสอบหร อการทวนสอบความใช ได ของ ว ธ มาตรฐาน และค าความไม แน นอนของการว ดในกรณ รายงานค าเป นปร มาณ Phiriyayon,

101 Feed Quality Control Laboratory Division Thank You ขอบค ณคะ สว สด